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Order NO. B540189
pEGFP-N1 哺乳细胞表达载体
英文名 pEGFP-N1 DNA
相关类别 载体与菌株 储存 冷冻(-20℃)
   
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B540189-0001 10 UG 现货
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产品描述

概述

pEGFP-N1编码野生型GFP(1-3)的红移变体,该变体已经过优化,可以在哺乳动物细胞中获得更亮的荧光和更高的表达。(最大激发波长= 488nm;最大发射波长= 507nm。)pEGFP-N1编码GFPmut1变体(4),其包含Phe-64对Leu和Ser-65对Thr的双氨基酸取代。EGFP基因的编码序列包含超过190个沉默碱基的变化,这些变化对应于人类密码子使用偏好(5)。EGFP侧翼的序列已转化为Kozak共有翻译起始位点(6),以进一步提高真核细胞的翻译效率。pEGFP-N1中的MCS在CMV的立即早期启动子(PCMV IE)和EGFP编码序列之间。如果克隆到MCS中的基因与EGFP处于同一阅读框中,并且没有中间的终止密码子,则将被表达为与EGFP N末端的融合体。EGFP基因下游的SV40聚腺苷酸信号指导EGFP mRNA 3'末端的正确处理。载体主链还包含SV40起点,用于在表达SV40 T抗原的哺乳动物细胞中复制。新霉素抗性盒(Neor)由SV40早期启动子,Tn5的新霉素/卡那霉素抗性基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV TK)基因的聚腺苷酸化信号组成,可通过以下方法选择稳定转染的真核细胞:G418。该盒上游的细菌启动子在大肠杆菌中表达卡那霉素抗性。

应用

融合到EGFP的N端保留天然蛋白的荧光特性,允许融合蛋白在体内定位。应该将靶基因克隆到pEGFP-N1中,以使其与EGFP编码序列符合读框,而没有插入框内的终止密码子。插入的基因应包括起始ATG密码子。可以使用任何标准转染方法将重组EGFP载体转染到哺乳动物细胞中。如果需要,可以使用G418(7)选择稳定的转化子。pEGFP-N1也可以简单地用于在目标细胞系中表达EGFP(例如,作为转染标记)。

技术规格

质粒类型 荧光蛋白报告载体
启动子 CMV
表达水平
克隆方法 多克隆位点,限制性内切酶
载体大小 4733bp
5'测序引物及序列 CMV-F:5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
3'测序引物及序列 EGFP-N:5'-CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG-3'
载体标签 C-EGFP
原核抗性 卡那霉素(Kanamycin)
筛选标记 新霉素(Neomycin)
备注 载体的MCS多克隆酶切位点,有EcoR I,BamH I等酶切位点
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