概述

构建新的重组DNA分子通常是用合适的限制性内切酶酶切和连接来进行.当目标片段的粘末端与新的载体的粘末端是相同或互补, 那么亚克隆将就很简单。然而在很多实验中，目标片段的末端与载体是不相互补的。经常需要将片段补平后再与其它的平端载体相连。本试剂盒的原理是利用大肠杆菌DNA多聚酶I的Klenow片段多聚酶活性能够补平不互补的5’端突出端为基础的。

特点

• 对于用2个不同限制性内切酶酶切所获得的片段，可以选择性补平一端。先用限制性酶#1切开DNA,然后用Klenow片段补平末端，再用75℃加热10分钟灭活,最后用限制性酶#2酶切。如果2种限制性酶的缓冲液是相容的，限制性酶#2的反应就可以在同一种缓冲液中进行。 T4 DNA 连接酶可以对平端和粘端DNA进行有效的连接。用此试剂盒可在短时间完成（1小时）连接反应。

应用

连接、转化

使用说明

请参考产品说明进行实验操作。

组分

Klenow DNA Polymerase， 3 U/μl；10 × Klenow Reaction Buffer；0.5 mM dNTP Mix；T4 DNA Ligase， 2 U/μl；10 × Ligation Buffer；50% PEG 4000；Sterilized ddH2O；说明书。