引物纯化方式选择
选择纯化方式
生工生物提供业内较全面的纯化方式,包括5项常规纯化方式和3项加强纯化方式。大部分的情况下,使用常规纯化方式已能满足绝大部分客户的定制需求。
常规纯化方式 | |
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纯化方式 | 简介 |
HAP HAP高效亲和吸附 | 即通过HAP树脂纯化柱进行纯化,和OPC比,负载量更大,且可避免一些短片段带入,提升了速度和纯度。HAP的推出,成为了大幅降低当时国内DNA价格门槛的里程碑。 |
PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 生工在经典的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳基础上进行工艺流程优化,大幅提高纯化速度,对DNA片段进行分离,再回收目的DNA。 |
ULTRAPAGE 增强聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 生工独有,分辨率高于PAGE,避免了人员切胶时回收到差别仅一个或几个碱基的引物,配合质谱检测,引物纯度和准确性均能得到提升 |
HPLC 高效液相色谱 | 根据高效液相色谱的原理,依据DNA的疏水性分离纯化到正确的产物 |
HPLC_CE (IVD) 体外诊断优化高效液相色谱 | 针对IVD应用优化,在毛细管电泳(CE)检测保证纯度的基础上,对HPLC纯化柱进行特殊去除残留工艺,尽可能避免交叉污染 |
增强纯化方式 | |
纯化方式 | 简介 |
IE-HPLC 离子交换HPLC | 离子交换(IE)HPLC基于相对电荷差将全长引物从截短的引物中分离纯化出来,可以有效去除N-1短片段。适合大多数的修饰,但不适合硫代、巯基等修饰。 |
2X HPLC 双重HPLC纯化 | 对于纯度要求高的引物,我们可提供双重HPLC纯化(先反相,后离子交换),尤其适合长度高于59个碱基且带有修饰的引物 |
PAGE+HPLC PAGE+HPLC双重纯化 | 对于纯度要求高的引物,我们可提供PAGE+HPLC双重纯化,即在一次PAGE纯化之后再进行一次HPLC纯化以进一步提高纯度,尤其适合长度高于59个碱基且带有修饰的引物 |
按应用来选择纯化方式
应用 | 纯化方式 | ||||
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HAP | PAGE | ULTRAPAGE | HPLC | HPLC_CE IE-HPLC 2X HPLC PAGE+HPLC | |
普通PCR/多重PCR/逆转录PCR(RT-PCR) | √ | √ | √ | √ | √ |
荧光定量PCR(qPCR)/数字PCR(dPCR) | √ | √ | √ | √ | √ |
一代测序(Sanger) | √ | √ | √ | √ | √ |
高通量测序(NGS) | √ | √ | √ | √ | √ |
全基因合成 | √ | √ | √ | √ | √ |
亚克隆/点突变 | √ | √ | √ | √ | |
基因构建/RNA干扰 | √ | √ | √ | √ | |
PCR产物用于克隆表达研究或基因重组等 | √ | √ | √ | ||
反义核酸 | √ | √ | |||
修饰或标记引物 | √ | √ | |||
化学及物理应用 | √ | √ | |||
体外诊断应用 | √ |
综合价格、引物长度、修饰等因素选择纯化方式
纯化方式 | 价格 | 纯度 | 引物长度(mer) | 带修饰 | 其他 | |||
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短片段 (~10) | 中片段 (11~59) | 长片段 (60~130) | 超长片段 (131~) 1 | |||||
HAP | 最低 | 较高 | 不适合 | 适合 | 不适合 | 不适合 | 不适合 | |
PAGE | 低 | 较高 | 不适合 | 适合 | 不适合 | 不适合 | 不适合 | |
ULTRAPAGE | 适中 | 高 | 不适合 | 推荐 | 适合 | 适合 | 不适合 | |
HPLC | 适中 | 高 | 推荐 | 推荐 | 适合 | 适合 | 推荐 | |
HPLC_CE (IVD) | 偏高 | 高 | 不适合 | 推荐 | 不适合 | 不适合 | 推荐 | 降低交叉 污染率 |
IE-HPLC | 最高 | 极高 | 不适合 | 推荐 | 推荐 3 | 推荐 3 | 推荐 2 | |
2X HPLC | 最高 | 极高 | 不适合 | 推荐 | 推荐 3 | 推荐 3 | 推荐 2 | |
PAGE+HPLC | 最高 | 极高 | 不适合 | 适合 | 推荐 | 推荐 | 不适合 |
备注:
1.由于超长片段合成难度较大,我们无法保证其成功率及纯度等,如需合成,请提前与技术支持沟通咨询;
2.某些修饰种类受限制;
3.兼并碱基不适用。