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DNA测序样品要求

各类样品模板均应提供相应的模板和引物信息,并清楚地填写《生工生物测序订单》

模板 要求
未纯化PCR产物 片段大于200 bp;
提供 30 μl以上的PCR扩增产物(浓度大于100 ng/μl);
取3 μl样品,能够清晰的检测出目的条带;
自带引物。
已纯化PCR产物 PCR产物溶于双蒸水中(请勿溶解在TE溶液中);
浓度大于100 ng/μl,体积大于20 μl,长片段需适当增加提供量;
电泳检测条带单一明亮;
自带引物。

质粒
需提供20 μl以上质粒, 浓度大于100 ng/μl,质粒溶于双蒸水中(请勿溶解在TE溶液中);
建议用相关试剂盒提取质粒;
如有可能,同时提供200 μl含有相应质粒的菌液备用;
需注明载体全称和插入目的片段长度及测序要求。
菌样 说明载体、抗性类型;我们提供氨苄青霉素和卡那霉素两种抗生素;其余类型抗生素需自备并附使用说明;
应为高拷贝质粒,对于低拷贝质粒,请直接提供约1 μg纯化质粒;
提供200 μl以上过夜培养(12 h)的菌液,加入终浓度为5-10%的灭菌甘油,于EP管中封口保存,防止交叉污染或渗漏;
大量样品测序,建议在一次性塑料培养皿固体培养基上穿刺培养;
建议尽量提供穿刺培养或斜面培养的菌种(装在EP管中)。
自带引物 浓度不低于10 pmol/μl(即10 μmol/L),体积10 μl以上,并请注明浓度;
随机引物(RAPD引物)、简并引物、长度不足15 bp或大于30 bp引物、有特殊标记的引物或不纯的引物均不能用于测序;
尽可能提供引物全序列、PCR退火温度等信息,以供参考。
免费提供的通用引物 M13+[即M13-47], M13-[即M13-48], M13(-20), M13(-26), T7promoter,
T7 terminator, SP6, T3, BGH,
5'/3'AOX, α-factor, -96gⅢ, pBV220+/-, pEGFP-N5'/3', pEGFP-C5',3',
pCMV5-F/R, pQE30+/-, 5'/3'AD,
pGEX5'/3', pGL3+/-, 27F, 1492R, CMV, U6promoter, S-Tag等通用引物。
如您需要的引物不在此列,请电话咨询或自带引物,如需生工合成,请注明。

温馨提示

1.对于穿刺培养菌、以及抽干的质粒可以采用常温运输。
2. 对于甘油菌、溶解保存的质粒、PCR已纯化和未纯化产物建议冷藏运输。