服务介绍

DNA甲基化是表观遗传学（Epigenetics）的重要组成部分，在人的胚胎发育、基因表达调控、X染色体失活、衰老以及许多人类疾病（如发育畸形、癌症、糖尿病和神经心理失调等）发生过程中发挥重要作用。DNA甲基化是在DNA甲基化转移（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5' 端的胞嘧啶转变为5' 甲基胞嘧啶，在基因组的某些区域中，通常位于基因的启动子区或是第一个外显子区，CpG序列密度很高，可以达均值的5倍以上。
常用的检测目标片段甲基化的方法是BSP，这种检测甲基化的方法可靠，且能确定目的片段中每一个CpG位点的甲基化程度，属于定量检测甲基化的方法，但是需要大量克隆，常做10个克隆的测序，一般对于甲基化程度低于10%的情况，克隆数量需要更多，费用和时间大大增加，所以BSP测序法有一定的局限性。本公司新推出一种将BSP和高通量测序结合起来的方法，具有一次性读取数据量大的优点，从而能够一次性更精确检测目的片段中CpG位点的甲基化率，能精确测定1%的甲基化程度，即NGS甲基化检测服务。

主要流程

基因组DNA提取 DNA亚硫酸氢盐处理 PCR NGS测序 数据分析

客户提供

• 提供样品

  血液样品：样品为EDTA 抗凝或枸椽酸钠抗凝，样品量大于0.5 ml，样品采集后于-20°C或-80°C保存；

  组织样品：样品可以为新鲜组织（最好-80°C保存）或石蜡包埋的组织，也可以是95%乙醇中固定的组织，组织量大于100 mg。

• 提供信息

  填写官网store.sangon.com客户专区下的下载中心中《基因甲基化位点检测服务订单》，务必提供详细的基因信息（序列或NCBI 登录号）。

交付

实验报告、原始图片、原始数据。

联系方式

电话：021-57072091 邮箱： service2@sangon.com

案例

项目：

客户提供10个组织样本，要求对其提供的*基因启动子区域的一个片段进行甲基化定量检测。

方案：

• 选择B518251 柱式动物基因组 DNA 抽提试剂盒，进行基因组DNA的提取；

• 对基因组DNA进行亚硫酸氢盐处理；

• 针对客户提供的目的序列设计并合成引物；

• 带有index的引物和DNA样本加入到配置好的体系中扩增；

• 所有PCR产物等量混合；

• 在IlluminaHiseq平台测序进行高通量测序，获得FastQ数据。

结果：

图1甲基化检测点状图

每行代表一个样本，每个原点代表一个位点的甲基化情况，黑色是甲基化，白色是未甲基化。第一行数字代表CpG位点位置，百分数代表对应CpG位点的甲基化率。

图2 甲基化检测热图

颜色深浅代表甲基化率高低，颜色越深甲基化程度越高，横向文本指样本，纵向代表CpG位点位置。