引物合成纯化方法选择指南
为了取得高纯度的终端产品,需要对初步合成引物进行纯化,纯化是寡核苷酸合成产品质量的关键,生工生物目前可进行HAP、PAGE、ULTRAPAGE及HPLC及HPLC_CE纯化。
生工生物不同纯化方式的介绍
参数 纯化方法 |
基本介绍 | 特点 |
HAP | 是生工生物自主研发的新型Oligo DNA纯化方法。HAP方法和HAP纯化柱,其原理是利用合成引物5’ 端DMT基团对HAP树脂专一性吸附、而不含DMT短链DNA不被吸附,从而达到分离纯化的目的。 | 速度快、价格低 |
PAGE | 是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,对DNA片段进行分离,然后从凝胶中回收目的DNA的方法。 | 性价比高、质量稳定 |
ULTRAPAGE | PAGE纯化方式进行升级优化,即在PAGE纯化的同时配合质谱对DNA进行定性分析,以保证回收片段的正确性。 | 质量稳定、准确率高 |
HPLC | 是使用高效液相色谱的原理,依据DNA的疏水性来分离产物的。 | 自动化程度高、纯度好 |
HPLC_CE | 即在HPLC纯化基础上增加毛细管电泳(CE)检测。 | 色谱加毛细管电泳双重精制,纯度较高 |
不同纯化方式的应用范围
应用 | 纯化方法 | ||||
HAP | PAGE | ULTRAPAGE | HPLC | HPLC_CE (IVD) | |
普通PCR/RT-PCR | √ | √ | √ | √ | √ |
测序 | √ | √ | √ | √ | √ |
全基因合成 | √ | √ | √ | √ | √ |
多重PCR/定量PCR | √ | √ | √ | √ | √ |
诊断PCR扩增 | √ | √ | √ | √ | √ |
高通量测序(NGS) | √ | √ | √ | √ | √ |
亚克隆,点突变 | √ | √ | √ | √ | |
基因构建/RNA干扰 | √ | √ | √ | √ | |
PCR产物用于克隆表达研究或基因重组等 | √ | √ | √ | ||
反义核酸 | √ | √ | |||
修饰或标记引物/化学或物理应用 | √ | √ | |||
体外诊断应用 | √ |
“√” 表示推荐的纯化方式