网 站
反 馈
网 站
指 南
我的订单
交易对帐
小E在线

有问题找小E,小E来帮您!

测序失败原因

  • PCR样品测序结果无信号,可能由以下几个原因造成:

    (1)模板浓度太低;
    (2)测序引物浓度太低或是发生降解;
    (3)测序引物的Tm值太低不适合于测序(测序反应的退火温度为52℃, 延伸温度60℃)。
    这些原因都会造成PCR反应中引物与模板配对时出现问题.建议您改进实验条件后重新进行测序。

  • PCR样品测序后发现有重叠现象,可能由以下几个方面的原因造成:

    (1)已纯化的PCR样品造成这种情况的原因是由于纯化回收实验过程中存在一定问题,未将模板中的非特异性条带去除干净;
    (2)未纯化的PCR产物造成这种情况的原因是目的片段附近含有大小相近的非特异性条带,我们通过琼脂糖凝胶回收,无法有效切除这种大小差别不是很明显的杂带;
    (3)模板的浓度较差或是已经降解,引物的浓度较差或是已经降解,测序PCR反应结束之后无法产生足够的扩增产物,导致测序信号较弱,杂背景较高,形成重叠现象。
    这些原因都可能造成PCR样品测序之后出现重叠现象.建议您改进后重新进行测序。

  • 质粒(菌样)测序结果无信号,可能由以下几个原因造成:

    (1)质粒本身浓度较低或是您提供的菌样提取的质粒浓度较低;
    (2)载体信息提供错误,选用的通用引物无法和质粒进行结合;
    (3)如果您使用的是自带引物进行测序,需要确定引物质量好坏以及提供的引物与模板本身是否存在结合位点。
    这些原因都可能造成测序反应中引物与模板配对时出现问题.建议您重新分析改进实验条件后进行测序。

  • 质粒样品测序后发现有重叠现象,可能由以下几个方面的原因造成的:

    (1)质粒模板不纯,客户质粒提取过程中存在污染或是用于提取质粒的菌株本身存在污染;
    (2)质粒的浓度较差或是已经降解,测序PCR反应结束之后无法产生足够的扩增产物,导致测序信号较弱,杂背景较高,形成重叠现象;
    (3)质粒模板本身与使用的引物存在多个结合位点,导致测序过程中扩增出多套模板,出现重叠现象。
    这些原因都可能造成样品测序之后出现重叠现象,建议您重新分析改进实验条件后重新进行测序。

  • 菌样测序后发现有重叠现象,可能由以下几个方面的原因造成的:

    (1)亚克隆试验过程中存在污染;
    (2)菌种提取的质粒或是使用的引物质量较差,测序反应结束之后没有产生足够的模板量,导致测序信号较弱,杂背景较高,形成重叠现象;
    (3)菌种提取的质粒本身与使用的测序引物存在多个结合位点,导致测序过程中扩增出多套模板,出现重叠现象。
    以上几种原因都可能造成质粒样品测序之后出现重叠现象,建议您改进实验条件后重新进行测序。