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引物纯化方式选择

选择纯化方式

生工生物提供业内最全面的纯化方式,包括5项常规纯化方式和3项加强纯化方式。大部分的情况下,使用常规纯化方式已能满足绝大部分客户的定制需求。

常规纯化方式
纯化方式 简介
HAP
HAP高效亲和吸附
即通过专利的HAP树脂纯化柱进行纯化,和OPC比,负载量更大,且可避免一些短片段带入,提升了速度和纯度。HAP的推出,成为了大幅降低当时国内DNA价格门槛的里程碑。
PAGE
聚丙烯酰胺凝胶电泳
生工在经典的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳基础上进行工艺流程优化,大幅提高纯化速度,对DNA片段进行分离,再回收目的DNA。
ULTRAPAGE
增强聚丙烯酰胺凝胶电泳
生工独有,分辨率高于PAGE,避免了人员切胶时回收到差别仅一个或几个碱基的引物,配合质谱检测,引物纯度和准确性均能得到提升
HPLC
高效液相色谱
根据高效液相色谱的原理,依据DNA的疏水性分离纯化到正确的产物
HPLC_CE (IVD)
体外诊断优化高效液相色谱
针对IVD应用优化,在毛细管电泳(CE)检测保证纯度的基础上,对HPLC纯化柱进行特殊去除残留工艺,最大化避免交叉污染
增强纯化方式
纯化方式 简介
IE-HPLC
离子交换HPLC
离子交换(IE)HPLC基于相对电荷差将全长引物从截短的引物中分离纯化出来,可以有效去除N-1短片段。适合大多数的修饰,但不适合硫代、巯基等修饰。
2X HPLC
双重HPLC纯化
对于纯度要求最高的引物,我们可提供双重HPLC纯化(先反相,后离子交换),尤其适合长度高于59个碱基且带有修饰的引物
PAGE+HPLC
PAGE+HPLC双重纯化
对于纯度要求最高的引物,我们可提供PAGE+HPLC双重纯化,即在一次PAGE纯化之后再进行一次HPLC纯化以进一步提高纯度,尤其适合长度高于59个碱基且带有修饰的引物

  按应用来选择纯化方式

应用 纯化方式
HAP PAGE ULTRAPAGE HPLC HPLC_CE
IE-HPLC
2X HPLC
PAGE+HPLC
普通PCR/多重PCR/逆转录PCR(RT-PCR)
荧光定量PCR(qPCR)/数字PCR(dPCR)
一代测序(Sanger)
高通量测序(NGS)
全基因合成
亚克隆/点突变
基因构建/RNA干扰
PCR产物用于克隆表达研究或基因重组等
反义核酸
修饰或标记引物
化学及物理应用
体外诊断应用

  综合价格、引物长度、修饰等因素选择纯化方式

纯化方式 价格 纯度 引物长度(mer) 带修饰 其他
短片段
(~10)
中片段
(11~59)
长片段
(60~130)
超长片段
(131~) 1
HAP 最低 较高 不适合 适合 不适合 不适合 不适合
PAGE 较高 不适合 适合 不适合 不适合 不适合
ULTRAPAGE 适中 不适合 推荐 适合 适合 不适合
HPLC 适中 推荐 推荐 适合 适合 推荐
HPLC_CE (IVD) 偏高 不适合 推荐 不适合 不适合 推荐 降低交叉
污染率
IE-HPLC 最高 极高 不适合 推荐 推荐 3 推荐 3 推荐 2
2X HPLC 最高 极高 不适合 推荐 推荐 3 推荐 3 推荐 2
PAGE+HPLC 最高 极高 不适合 适合 推荐 推荐 不适合

备注:

1. 由于超长片段合成难度较大,我们无法保证其成功率及纯度等,如需合成,请提前与技术支持沟通咨询;

2. 某些修饰种类受限制;

3. 兼并碱基不适用。