质粒抽提常见问题解答

1.没有DNA被洗脱出来

没有用乙醇稀释Wash Buffer，按前面指导的方法准备DNA Wash Buffer

2.DNA产量低

a.细胞裂解率低

只使用含有氨苄青霉素的LB或YT培养基.使用基本方案时，不要使用超过5ml的高拷贝质粒培养物.

在加入Solution‖前细胞没有充分混匀，可漩渦振荡悬浮液使之充分混匀.加入Solution‖后，延长孵育时间可获得清晰的裂解液.如果Solution‖没有盖紧，可能需要重配.可按以下准备：0.2N NaOH，1%SDS.

b.细菌培养物生长过度或不新鲜

不要于37℃培养超过16小时，分离质粒前长时间存放培养物是不利的.

c.使用的是低拷贝数质粒

增加培养物的体积至10ml，或使用质粒小量提取试剂盒II，培养物体积为25ml.

3.产量中有大分子量的DNA污染

加入Solution‖后过分混和细胞裂解液，加入Solution‖后不要猛烈振荡或搖匀，可轻轻颠倒离心管几次使充分混匀

4.光密度与琼脂糖凝胶上的DNA不符

从柱子洗脱下來的痕量杂质使A260升高；确保按操作指南中的步骤7和8洗脱柱子；另外，还依赖于琼脂糖／溴化乙锭电泳测定

5. 琼脂糖凝胶上可见RNA帶

SolutionI没有加入RNase A

6. 在琼脂糖凝胶上点样时，质粒漂出点样孔