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C1 化学合成基因
C2-1 基因定点突变	C2-4 质粒提取服务
C2-2目的基因的获取及其克隆	C2-5 细菌16S rDNA及真菌ITS区菌种鉴定
C2-3 密码子优化和基因设计服务	C2-6 基因突变及单核苷酸多态性(SNP)检测

C1 化学合成基因
基因的研究是生命科学的一大基石。获得基因的途径有两个，其一是直接从生物体的核酸(基因组DNA或mRNA)钓取，其二是通过人工化学合成获得。但人工合成基因法有其独特的优点：①合成周期短，可以保证序列的100%正确无误。②当将真核基因克隆在原核生物中表达时，需将真核生物偏爱的密码子改为原核生物偏爱的密码子，才能实现高效表达，解决这一问题最好的办法是根据相应细胞的密码子偏好性对基因序列进行密码子优化，之后人工合成基因；③当只知某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列时，最好的办法也是通过人工合成基因进行克隆和表达。④可根据需要进行基因的定点突变以改造基因。⑤研究人员根据自己的意愿设计得到自然界中很难获得甚至不存在的基因。因此，化学合成基因很有可能取代从生物体中钓取目的基因的原始方法。我公司可以根据您的任何需要化学合成相应的基因序列。

1. 基因设计： 根据您可以提供的原始信息，专业人员可以以如下方式为您提供国际一流的专业服务：
1. 当您提供最终的DNA序列时，我们的专业人员将根据您的要求对您提供的序列进行专业的分析，为您提供相关的基因结构、克隆、表达等方面的有效咨询服务。
2. 根据您提出的具体要求，由我们的专业人员为您提供免费基因设计服务。最终序列经您确认后可作为基因合成的基本信息。
3. 上海生工提供的免费基因设计服务包括完整的基因设计方案制定、密码子优化和克隆方案的制定等。
2. 我公司用于基因合成的标准载体为pUC系列和pBlueScript系列。除此以外的其它任何载体均视为您的载体。
3. 如果您需要使用上述标准载体以外的载体，则该载体应由您提供，并在结算时按克隆难易程度收取500-1000元的亚克隆费用。
4. 本公司与您在达成一致意见后，签订基因合成服务协议和保密合同，您交纳相应预付款。预付款到帐即为基因合成开始期限。

收费标准：（保证国内最低价）

基因全长（bp）	>交货期限（工作日）	价格（元/bp）
＜1,000	10	询价
1,000－2,000	15	询价
2000-3000	20	询价
＞3,000	每增加1KB增加5个工作日	询价
特殊序列	协商	协商

 

• (1) 小于150bp的基因，统一按150bp收费，不合成多聚体；
• (2) 若订货量较大，价格从优；
• (3) 服务协议签订之后，您不得随意更改基因序列；
• (4) 若需克隆到您的载体，每次亚克隆需增加五个工作日
• 　　6. 向您提供的技术资料和产品包括：
• a) 不少于1mg的含目的基因的通用载体质粒一份。
• b) 含上述质粒的菌株一份；
• c) 基因序列100％正确的原始测序报告正本电子版一份；
• d) 基因合成报告单一份。

7. 服务特色：

• (1) 基因合成经验丰富，已完成合成的基因近100，000条；
• (2) 交货迅速，严格执行服务协议条款；
• (3) 服务对象面向全球，完成众多国外客户的订单；
• (4) 价格低廉，接近成本价；
• (5) 可以进行具有复杂结构基因（高GC含量、重复结构等）的合成；
• (6) 忠实执行保密合同，为客户负责。

C2 其他相关服务

C2-1 基因定点突变：

• A. 服务内容

在很多情况下，您获得的基因序列可能并不是您需要的最终序列，或许在某些地方有部分碱基不符合您的实验要求。比如有部分多余的碱基，或者丢失了部分碱基，或者个别碱基有突变，这些我们姑且都认为它是基因突变。那么要得到最终符合要求的序列，便需要对其进行修改。我们总称为基因突变服务。我们可根据您的任何需要对错误的序列做任何修改，以达到您的最终要求。

 

• B. 服务说明

您须提供材料：含待变基因的质粒一份，量不少于1.0 mg；待变基因原始序列文件及原始测列图谱文件各一份；待变基因及其载体质粒的生物特性，如是否影响细菌增殖等。

C.收费标准

突变点数		1个	2个	3个	3个以上
金额	<1kb	1,200元	2,000元	3,000元	询价
	1~2kb	1,800元	3,000元	4,000元	询价
	>2kb	询价	询价	?	?

 

D.提供结果

实验报告、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图、含有目的基因的质粒及甘油菌（或PCR产物)。

 

C2-2目的基因的获取及其克隆

A.服务内容

● 基因组DNA的提取/总RNA提取

● 以基因组DNA或cDNA为模板PCR扩增得到目的基因

● 目的基因PCR产物的纯化及测序

● 目的基因的克隆及测序

● 目的基因亚克隆至表达载体中

 

B.服务说明

1. 我们目前接收的样品形式为与参考序列物种一致的材料、上述材料的基因组DNA或cDNA。

1) 实验材料必须保证新鲜，请您采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。

2) 基因组DNA无明显降解，总量大于5? ug。如果基因丰度较低或调取的基因较长，请您提供尽量多的材料。

2. 由于材料的个体差异及PCR过程中会产生突变等原因，我们不保证获取的基因与参考序列的碱基完全一致

 

C.收费标准

服务内容	收费标准	实验周期
基因组DNA提取/总RNA提取	260-900元/样品	3个工作日
目的基因获取后PCR产物纯化、测序	询价	10个工作日
目的基因获取后克隆、测序	询价	15个工作日
目的基因亚克隆至表达载体	800-1500元/样品	5个工作日

以上实验周期是针对正常实验样品制定的，样品特殊或样品多时除外。

 

D.提供结果

实验报告、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图、含有目的基因的质粒及甘油菌（或PCR产物)。

C2-3 密码子优化和基因设计服务

A.服务内容

遗传密码有64种，但是绝大多数生物倾向于利用这些密码子中的一部分。那些被最频繁利用的称为最佳密码子(optimal codons)，那些不被经常利用的称为稀有或利用率低的密码子(rare or low-usage codons)。实际上用做蛋白表达或生产的每种生物（包括大肠杆菌，酵母，哺乳动物细胞，Pichia，植物细胞和昆虫细胞）都表现出某种程度的密码子利用的差异或偏爱。大肠杆菌、酵母、果蝇、灵长类等每种生物都有独特的8个密码子极少被利用。有趣的是，灵长类和酵母有6个同样的利用率低的密码子。大肠杆菌、酵母和果蝇中编码丰度高的蛋白质的基因明显避免低利用率的密码子。因此，重组蛋白的表达可能受密码子利用的影响（尤其在异源表达系统中）的事实并不很奇怪。你的基因利用的密码子可能不是你正在利用的蛋白生产系统进行高水平表达所偏爱的密码子，这种情况是可能的。利用偏爱密码子(preferred codons)并避免利用率低的或稀有的密码子可以合成基因，基因的这种重新设计叫密码子最佳化。

 

B.服务说明

1.您须提供受体生物或细胞的详细信息

2.您须提供氨基酸序列。当不能够提供氨基酸序列时，则应提供DNA序列，并说明起始密码和终止密码的位置。

3.若有特别要求时，须附加说明。

4.我们的专业人员将根据您提供的信息进行密码子优化或者基因设计。设计完成后，将交付您进行审查。

 

C.收费标准

每100bp 75元人民币。对基因的序列有特殊要求的，费用将适当增加。如设计的基因在我公司合成则可以免收优化或设计服务，如条款C1.1所述。

 

C2-4 质粒提取服务

A.服务内容

1. 普通质粒提取

根据您的需要，可一次性提取10-500 ug的质粒。提取后的质粒基本不含蛋白质、基因组DNA及Total RNA污染，带型清晰标准，可满足PCR扩增、测序、限制酶酶切、转化等常规实验的需要。

2. 超纯质粒提取

超纯质粒在提取过程中使用了一种特殊洗液，可大大减少内毒素的污染。经无内毒素水平检测，内毒素含量比普通质粒减少了60%以上。提取后的质粒能够用于转染，且费用低于无内毒素质粒提取。

3. 无内毒素质粒提取

革兰氏阴性细菌由于自溶或其他原因被破坏而从其细胞壁上释放出的毒性脂多糖称内毒素，它是影响细胞转染效率的重要因素，无内毒素质粒是获得高质量转染实验所必备的。

 

B.服务说明

1. 如果您提供的样品为质粒，请保证质粒的量≥100 ng，以满足琼脂糖凝胶电泳检测及转化需要；如果您提供甘油或穿刺保存菌种，请确保菌体活力较高，或将重新活化后的菌种寄给我们。

2. 我们首先对您提供的样品进行小量培养提取预实验，以鉴定质粒的正确性（与您提供的背景资料相符）及拷贝数（2ml培养提取量<1.5ug为低拷）。

3. 如果质粒为非氨卞青霉素、卡那霉素和氯霉素抗性时，请您提供抗生素及抗生素工作浓度。

4. 收费标准是针对高拷贝质粒制定的，低拷贝质粒请询价。

5. 如果需要进行PCR或测序检测，请提供PCR引物或测序引物，或您提供引物序列，由本公司合成。引物合成、测序等费用，需额外收取。

6. 进行无内毒素质粒提取后我们通常不进行内毒素含量检测。由于提取质粒的所有步骤均按照试剂盒的标准流程进行，因此提取的质粒内毒素含量小于100 E.U./mg。

• C. 收费标准

服务内容	提取量	收费标准	交货期限
普通质粒提取	10ug	50元/样品	3个工作日
	50ug	150元/样品	6个工作日
	100ug	250元/样品
超纯质粒提取	50ug	300元/样品
	100ug	500元/样品
无内毒素质粒提取	100ug	800元/样品
	200ug	1500元/样品

 

D.提供结果

实验报告（包括质粒电泳照片及OD值测定结果）、1.7≤OD260/280≤2.0的质粒、甘油菌及穿刺菌。

 

C2-5 细菌16S rDNA及真菌ITS区菌种鉴定

A.服务内容

1. 细菌16S rDNA部分序列分析

扩增细菌16S rRNA前500 bp的片段，只需进行一个测序反应，即可得到含有部分种属特异性的16S信息，是一种较为经济便捷的鉴定方法。

2. 细菌16S rDNA全序列分析

扩增细菌16S rRNA的全长序列，约1500 bp左右，需进行三个测序反应，以得到较为全面的种属特异性信息。

3. ITS全序列分析

PCR扩增真菌ITS区片段，长度在300~1000 bp左右，依据PCR扩增片段的长度，进行一个或两个测序反应，即可得到ITS区全序列信息。

 

B.服务说明

1. 我们目前接收的样品形式为：基因组DNA、带有单菌落的平板或斜面。

2. 基因组DNA的浓度不低于10 ng/ul，总体积不少于20/ul。平板或斜面应长有至少分离三次以上的单菌落。

3. 由于革兰氏阳性细菌的细胞壁较厚，采用试剂盒常规方法较难破壁，建议您最好提供基因组DNA。

4. 对于一些特殊的真菌我们要求：丝状真菌，液体培养的菌丝，菌丝要保证新鲜，且经过分纯无其它菌体污染；酵母类真菌，斜面或平板形式的新鲜单菌落，且至少经过三次以上划线分离；对于某些真菌，使用试剂盒常规方法破壁困难，建议您最好提供基因组DNA。

5. 如果因实验样品不纯造成的测序套峰，本公司将收取全额实验费用。

 

C.收费标准

服务内容	样品	收费标准	交货期限
细菌16s rDNA部分序列分析	基因组或菌样	300元/样品	10个工作日
细菌16s rDNA全序列分析	基因组或菌样	500元/样品
真菌ITS全序列分析	基因组DNA	400元/样品	10个工作日
	菌样	800元/样品

 

D.提供结果

实验报告（包括PCR产物照片、菌种鉴定NCBI参考结果等)、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图。

 

C2-6 基因突变及单核苷酸多态性(SNP)检测

技术背景

基因突变主要是指在基因水平上由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化，亦称点突变，主要发生在外显子上。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。SNP的分布不均匀，非转录序列中要多于转录序列，绝大多数位于蛋白的非编码区。通常情况下是一种二等位基因的变异，多为转换，即一种嘧啶碱基换为另一种嘧啶碱基，或一种嘌呤碱基换为另一种嘌呤碱基，转换与颠换之比为2：1。SNP在CG序列上出现最为频繁，而且多是C→T，因为CG中C即胞嘧啶常为甲基化的，自发脱氨后即变为胸腺嘧啶。

A.服务内容

1．直接测序法

在所有基因突变及SNP位点的检测方法中，对欲检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法。通常情况下，纯合型位点测序峰为单一峰型，而杂合型的测序峰为套峰，因而很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%，测序一样是检测 基因突变SNP分型的金标准。操作流程：

．样品用本公司试剂盒进行基因组DNA提取。

．根据不同的区域进行引物设计，并在NCBI网站做BLAST。在本公司合成引物。

．对所有样品进行基因扩增、测序。

．基因突变及SNP分型统计。

2．用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测法

本公司不仅能对有酶切位点的基因突变及SNP位点进行检测，而且可对任意一个SNP位点进行酶切位点改造，使该位点变成常见酶切位点而进行鉴定。同时，利用巢式 PCR 技术，能同时对多个位点进行分型分析。操作流程：

．样品用本公司试剂盒进行基因组DNA提取。

．根据不同的区域进行引物设计，并在NCBI网站做BLAST。在本公司合成引物。

．对所有样品进行基因扩增及PCR产物回收。

．分析或改造基因突变及SNP位点，确定酶切用酶，进行酶切分析。

．基因突变及SNP分型统计。

 

B.服务说明

1. 样品要求：

．基因组DNA：样品浓度不低于10 ng/?l，总体积一般不少于30?，并根据样本数量调整。

．血液样品：样品为EDTA抗凝或枸椽酸钠抗凝，样品量大于0.2ml，样品采集后于-20℃或-80℃保存。

．组织样品：样品可以为新鲜组织（最好－80℃保存）或石蜡包埋的组织，也可以是95%乙醇中固定的组织，组织量大于100mg。

2. 建议您自行设计引物，如需本公司设计引物，要收取额外费用。

3. 提供祥细的基因信息，确定检测外显子及SNP位点。

 

C.收费标准

服务内容	样品	数量	单价	交货期限	数量	价格
测序法筛查基因突变位点	基因组DNA	≤10个	150元/外显子	7个工作日	＞10个	协商
	血样或组织	≤10个	200元/外显子	10个工作日	＞10个	协商
测序法检测	基因组DNA	≤20个	120元/SNP位点	8个工作日	＞20个	协商
SNP位点	血样或组织	≤20个	150元/SNP位点	12个工作日	＞20个	协商
PCR-RFLP法检测SNP位点	基因组DNA	≤50个	40元/SNP位点	8个工作日	＞50个	协商
	血样或组织	≤50个	55元/SNP位点	12个工作日	＞50个	协商

 

D.提供资料

实验报告（包括PCR电泳照片、PCR-RFLP酶切电泳图、统计结果等)、测序彩色波形图、测序方向图、序列碱基图。

C3 联系方式：

TEL：	全国免费电话800-820-1016转基因部或021-37772163/2164/2165
FAX：	021-37772170
E-mail：	gene@sangon.com
Website：	http://www.sangon.com
取样：	请与上海生工全国各地办事处联系